Υψηλή σκόνη πρωτεϊνάσης Κ βιοδραστικότητας για τον καθαρισμό DNA και RNA

Υψηλή πρωτεϊνάση Κ βιοδραστικότητας για τον καθαρισμό DNA και RNA

Περιγραφή

Η πρωτεϊνάση Κ είναι χαρακτηριστικό μέλος της subtilisin οικογένειας των πρωτεϊνάσεων. Αποτελείται από 278 αμινοξέα, με τη μοριακή μάζα 29kDa, και το pi είναι 8,9. Η πρωτεϊνάση Κ είναι endopeptidase και φέρνει επί του ενεργού τόπου της την καταλυτική τριάδα Asp39, His69, Ser224. Πλήρης ενζυματικός του που ενεργοποιείται από το ασβέστιο, το ένζυμο αφομοιώνει τις πρωτεΐνες κατά προτίμηση μετά από τα υδροφοβικά αμινοξέα. Αν και τα ιόντα ασβεστίου δεν έχουν επιπτώσεις στην ενζυμική δραστηριότητα, συμβάλλουν στη σταθερότητά του. Οι πρωτεΐνες θα αφομοιωθούν εντελώς εάν ο χρόνος επώασης είναι μακροχρόνιος και η συγκέντρωση πρωτεάσεων αρκετά υψηλή. Η πρωτεϊνάση Κ είναι επίσης σταθερή πέρα από μια ευρεία σειρά pH (4-12), με ένα βέλτιστο pH του pH 8,0. Μια ανύψωση της θερμοκρασίας αντίδρασης από 37 °C σε 50-60 °C μπορεί να αυξήσει τη δραστηριότητα αρκετές φορές, όπως την προσθήκη 0.5-1% (SDS) ή το χλωρίδιο Guanidinium, το θειοκυανικό άλας Guanidinium και την ουρία.

Κατά τη διάρκεια του καθαρισμού DNA και RNA, υπάρχουν πολλές μολύνοντας πρωτεΐνες παρούσες. Αυτοί οι μολυσματικοί παράγοντες πρέπει να αφαιρεθούν. Η πρωτεϊνάση Κ, που είναι μια ευρεία πρωτεάση σερίνης φάσματος, χρησιμοποιείται σε πολλά πρωτόκολλα καθαρισμού DNA και RNA για να αφομοιώσει αυτοί που μολύνουν τις πρωτεΐνες. Η προσθήκη της πρωτεϊνάσης Κ στις προετοιμασίες νουκλεϊνικού οξέος αδρανοποιεί γρήγορα τα nucleases που μπορούν ειδάλλως να υποβιβάσουν το DNA ή το RNA κατά τη διάρκεια του καθαρισμού.

Η recombianant πρωτεϊνάση Κ βιοτεχνολογιών Healthgen (rProK) έχει και τη λυοφιλοποιημένη σκόνη και το υγρό. Για τη λυοφιλοποιημένη σκόνη, δεν υπάρχει καμία οποιαδήποτε πρόσθετη ουσία.